分光光度計是實驗室常用的精密儀器，在醫(yī)院中有著廣泛的應(yīng)用，主要用于測量溶液的濃度。分光光度計屬于計量強制檢定項目，檢定周期應(yīng)＜1年。目前的檢定規(guī)程為中華人民共和國國家計量檢定規(guī)程“紫外、可見、近紅外分光光度計檢定規(guī)程”該規(guī)程對自動掃描型儀器的檢定方法描述并不多，有些參數(shù)不可設(shè)置，在此介紹一些檢定技巧。

   吸收池配套性：分光光度計的吸收池是成對配套，分為玻璃和石英兩種材質(zhì)。由于玻璃吸收紫外光，其適用波長為400～2000nm；石英適用波長為180～3000 nm。按照檢定規(guī)程，配對的吸收池透射比的差值≤0.5%。為保證其配套性，2個吸收池盡量同時使用，注意保養(yǎng)。使用時樣品液應(yīng)達到2/3的高度，且注意不要溢出。使用完后用蒸餾水清洗同樣的次數(shù)，拭鏡紙單向擦干。一般使用1年后吸收池的配套性會變差，應(yīng)重新配對。

   基線平直度調(diào)整：基線平直度是指掃描透射比為100和0時基線傾斜或彎曲的程度。如果基線的平直性差，就會使樣品的吸收光譜中各吸收峰之間的比值發(fā)生變化，給定性分析造成錯誤。導致基線不平直的主要原因是儀器的光學系統(tǒng)失調(diào)，兩光束不平衡。如儀器受震動，光源位置變動等都會引起光學系統(tǒng)故障(基線平直度要以吸光度表示)。有些設(shè)備對基線平直非常敏感，容易超

出規(guī)程標準，因此在進行此項測量時要使機器充分預熱，光譜帶寬設(shè)為2 nm，并且在儀器遮光罩關(guān)閉后穩(wěn)定2min后再進行波長掃描。

   光譜帶寬調(diào)整：規(guī)程中對噪聲、漂移、最小光譜帶寬和基線平直度幾個項目的測定需要調(diào)整光譜帶寬。光譜帶寬是由狹縫寬度決定，理論上，光柵型儀器當狹縫寬度小于衍射寬度時，光譜帶寬由衍射寬度決定；當狹縫寬度大于衍射寬度時，光譜帶寬由狹縫寬度決定。狹縫越小，得到的單色光越純，但光的強度降低。目前有很多儀器為固定光譜帶寬，而規(guī)程規(guī)定在測量時設(shè)置為2 nm，固定光譜帶寬儀器可不設(shè)。事實上，當光譜帶寬不能設(shè)置時，容易使光電流的噪聲偏大。

   掃描速度選擇：進行波長最大允許誤差的測量時，需要對氧化鈥濾光片進行波長掃描。為節(jié)省時間，設(shè)定波長范圍只需包含所要同標準值對比的波峰波谷即可。首先要對照上一次的檢測報告或儀器說明書明確儀器波長重復性，設(shè)置使采樣間隔小于波長重復性的掃描速度。如果不能設(shè)定采樣間隔，則應(yīng)設(shè)定掃描速度＜120 nm/min。進行基線平直度測量時，全波段掃描的速度應(yīng)選擇采樣間隔為1 nm的速度，若不能設(shè)置，則可選擇400～800 nm/min。

   波長分段與儀器級別：在紫外、可見、近紅外分光光度計檢定規(guī)程中，增加了對儀器的工作波長及儀器性能級別的劃分。其工作波長分為A段、B段和C段。儀器性能從高到低分為4個級別，即I級、II級、III級、IV級。儀器的每一項計量指標均應(yīng)根據(jù)級別劃分標準。因此，應(yīng)對照規(guī)程在計量證書中給出每項指標在每個波段的儀器級別，以方便使用者對儀器性能有更好的判斷。

   光學器件的維護與保養(yǎng)：光學器件忌灰塵和觸摸，要保證使用環(huán)境的清潔，濾光片使用完后要及時放回暗盒中。如光學器件粘有少量灰塵，可用小功率吸塵器處理。當環(huán)境濕度過大或PM2.5含量過高，也會對測量準確度造成影響。分光光度計屬于精密儀器應(yīng)盡量避免搬動，以免造成光路的輕微改變，儀器不用時應(yīng)關(guān)閉電源，延長其光源壽命。

   分光光度計的檢定是一項科學、嚴謹和細致的工作。由于該儀器是光學精密儀器，測量結(jié)果極易受到濕度、灰塵、振動及霉斑等偶然因素的干擾，實踐中要區(qū)分是分光光度計本身的問題還是偶然因素導致的誤差等各種問題，嚴格遵守檢定規(guī)程規(guī)定流程和檢測環(huán)境的要求正確使用、保養(yǎng)儀器。同時，加強對使用人員的培訓也是保證儀器正常運行、測量數(shù)據(jù)準確可靠的重要途徑。